EdU(5-Ethynyl-2’- deoxyuridine)是一種胸腺嘧啶核苷類似物，能夠在細(xì)胞增殖時期代替胸腺嘧啶(T)滲入正在復(fù)制的DNA分子中，通過基于EdU與Apollo?熒光染料的特異性反應(yīng)快速檢測細(xì)胞DNA復(fù)制活性，適用于細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、生長與發(fā)育、DNA修復(fù)、病毒復(fù)制、細(xì)胞標(biāo)記示蹤等方面。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示：

EDU

實(shí)驗(yàn)流程：

　　1.每孔加入2 mg/mL甘氨酸，脫色搖床孵育5分鐘后，棄甘氨酸溶液;

　　注：作用是中和多聚甲醛，當(dāng)采用其他方式進(jìn)行細(xì)胞固定時可省略此步驟;

　　2.每孔加入100 μL PBS，脫色搖床清洗5分鐘，棄PBS;

　　3.每孔加入100μL滲透劑(0.5% TritonX-100的PBS)脫色搖床孵育10分鐘;PBS清洗1次，5分鐘。

　　注：當(dāng)實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行其他抗體染色，或由于某些細(xì)胞類型對染料的吸附性較高，可能需要增強(qiáng)細(xì)胞膜通透性。

　　4.每孔加入100 μL的1X Apollo?染色反應(yīng)液，避光、室溫、脫色搖床孵育30分鐘后，棄染色反應(yīng)液;

　　5.加入100 μL滲透劑(0.5% TritonX-100的PBS)脫色搖床清洗2~3次，每次10分鐘，棄滲透劑;

　　6.(加強(qiáng))每孔每次加入100 μL甲醇清洗1~2次，每次5分鐘;PBS清洗1次，每次5分鐘。

　　注：由于某些細(xì)胞對染料的吸附性較高，需采用加強(qiáng)方式洗脫以降低染料背景。

　　染DAPI，封片，鏡檢。

送樣運(yùn)輸要求：

　　1.組織樣本放置于20倍樣本體積的固定液中固定24h以上，常溫運(yùn)輸送樣。

　　2.石蠟切片常溫保存運(yùn)輸

　　3.冰凍切片-20℃保存運(yùn)輸

　　4.細(xì)胞爬片固定液浸泡，4℃保存運(yùn)輸