原位雜交原理：原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交，從而對(duì)特定核酸順序進(jìn)行精確定量定位的過程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。

　　原位雜交(FISH雙標(biāo))可以檢測(cè)兩個(gè)靶基因的共定位情況。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示：

實(shí)驗(yàn)流程：

　　細(xì)胞爬片熒光探針原位雜交雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)步驟

　　1、細(xì)胞爬片固定：細(xì)胞爬片置于4%多聚甲醛(DEPC)固定20min，于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。

　　2、消化：基因筆畫圈，根據(jù)不同組織不同指標(biāo)特性，滴加蛋白酶K(20ug/ml)消化8min。純水沖洗后PBS洗3次×5min。.

　　3、預(yù)雜交：滴加預(yù)雜交液37°恒溫箱1h。

　　4、雜交：傾去預(yù)雜交液，滴加含探針1雜交液，37度雜交過夜。

　　5、雜交后洗滌：洗去雜交液，2×SSC，37°C 洗10min，1×SSC，37°C洗2×5min，0.5×SSC 37°洗10min。若非特異雜交體較多，可以增加甲酰胺洗滌

　　6、雜交：傾去預(yù)雜交液，滴加含探針2雜交液，37度雜交過夜。

　　7、DAPI復(fù)染核：切片滴加DAPI染液，避光孵育8min，沖洗后滴加抗熒光淬滅封片劑封片。

　　8、鏡檢拍照：切片于尼康正置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。(紫外激發(fā)波長330-380nm，發(fā)射波長420nm,發(fā)藍(lán)光;FAM(488)綠光激發(fā)波長465-495nm，發(fā)射波長515-555 nm，發(fā)綠光;CY3紅光激發(fā)波長510-560，發(fā)射波長590nm，發(fā)紅光。)

送樣運(yùn)輸要求：

　　冰切：標(biāo)本放原位雜交固定液中，常溫運(yùn)輸;冰凍切片-20°運(yùn)輸。

　　石蠟：標(biāo)本放原位雜交固定液中，常溫運(yùn)輸;石蠟切片常溫運(yùn)輸。

　　細(xì)胞爬片：細(xì)胞爬片加原位雜交固定液固定15min后，密封，4度運(yùn)輸。共聚焦皿

　　新鮮組織：組織取出后可以立即冷凍處理，后干冰運(yùn)輸?shù)轿錆h進(jìn)行后續(xù)冰凍切片處理。新鮮組織-80°保存。