原位雜交與免疫熒光原理：原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交，從而對特定核酸順序進(jìn)行精確定量定位的過程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。免疫熒光就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標(biāo)記在抗體或抗原上，與其相應(yīng)的抗原或抗體結(jié)合后，在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應(yīng)。

　　通過原位雜交及免疫熒光雙抗進(jìn)行三標(biāo)，可以在組織細(xì)胞中對核酸分子和蛋白指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行共定位、以及定性分析，可以用來從共定位角度提示核酸和蛋白存在相互作用。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示：

實(shí)驗(yàn)流程：

　　石蠟切片熒光探針原位雜交與免疫熒光雙抗三染實(shí)驗(yàn)步驟

　　1. 組織固定、脫水、切片、石蠟切片脫蠟至水;

　　2. 消化：切片于修復(fù)液中煮沸10-15分鐘，滴加蛋白酶K消化;

　　3. 預(yù)雜交：滴加預(yù)雜交液，37°C孵育1h。

　　4. 雜交：傾去預(yù)雜交液，滴加含探針 雜交液, 濃度 ，恒溫箱 度雜交過夜。

　　5. 雜交后洗滌：SSC洗滌;

　　6. 孵育一抗、二抗：滴加一抗，4℃過夜，后PBS洗3×5min;滴加相應(yīng)二抗，室溫孵育50min，PBS洗3×5min;

　　7. 孵育另一抗、二抗：滴加一抗，4℃過夜，后PBS洗3×5min;滴加相應(yīng)二抗，室溫孵育50min，PBS洗3×5min;

　　7. DAPI復(fù)染核：切片滴加DAPI染液，避光孵育8min;

　　8. 鏡檢拍照;

送樣運(yùn)輸要求：

　　冰切。標(biāo)本放原位雜交固定液中，常溫運(yùn)輸;冰凍切片-20°運(yùn)輸。

　　石蠟。標(biāo)本放原位雜交固定液中，常溫運(yùn)輸;石蠟切片常溫運(yùn)輸。

　　細(xì)胞爬片。細(xì)胞爬片加原位雜交固定液固定15min后，密封，4度運(yùn)輸。共聚焦皿

　　新鮮組織：組織取出后可以立即冷凍處理，后干冰運(yùn)輸?shù)轿錆h進(jìn)行后續(xù)冰凍切片處理。新鮮組織-80°保存。