該項技術是組織樣品經低溫脫水滲透LR White樹脂低溫聚合包埋，超薄切片70-80nm，用特異性一抗與待檢測抗原結合然后用帶有膠體金標記的二抗與一抗抗原復合物結合，在電子顯微鏡下觀察，由于二抗上的膠體金形成一定的電子密度而精確指示出相應抗原在亞細胞水平上的定位。

樣本準備：

       組織取下后立即投入免疫電鏡專用固定液，4°保存，4°冰袋運輸，在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結冰。樣品固定后應盡快安排做后續包埋和免疫標記實驗，減少抗原丟失的可能性。

注意事項：

1、1-3min內取樣，取樣組織1mm³大小。取材前可提前準備裝有免疫電鏡固定液A液的培養皿，將小組織塊離體取下后立即投入培養皿內，用手術刀在培養皿的固定液中進行切割成1mm³的小組織塊。再將切割好的小組織塊轉移至裝有新的免疫電鏡固定液的EP管內繼續固定。

2、取材時盡量精確到需要觀察的目的部位（如觀察腎小球取腎皮質；觀察胰島取胰島豐富的胰尾；皮膚，腸胃等在固定液中易打卷的組織可將組織粘在濾紙上進行固定）。

3、取材時一定注意避免鑷子擠壓等機械損傷，刀片要鋒利避免挫傷組織。

實驗步驟：

   免疫標記：

①復溫水合：鎳網從4℃取出用超純水懸浮5min；

②清洗：TBS室溫清洗3次，每次5min；

③封閉：1%BSA/TBS的封閉液室溫封閉30min；

④加一抗：抗體與封閉液按一定稀釋比稀釋后4℃過夜孵育；

⑤清洗：室溫復溫后，TBS清洗3次，每次5min；

⑥加二抗：二抗與二抗稀釋液按一定稀釋比稀釋，先室溫孵育20min，后轉37℃烘箱孵育1h，然后轉室溫復溫0.5h。實驗過程中防止干片。

⑦清洗：TBS清洗5次，每次5min后，超純水清洗5次，每次5min。

⑧鈾復染：鎳網于2%醋酸鈾飽和酒精溶液避光染色8min；70%酒精清洗3次；超純水清洗3次。

⑨烘干：清洗后的鎳網用濾紙吸干后放入網板中，37℃烘箱放置10min烘干備用。

效果展示：