亞硫酸氫鈉修飾基因組DNA

       如不特別指出，所用雙蒸水（ddH2O）均經(jīng)高壓蒸汽滅菌。

       1、將約2μgDNA于1.5mlEP管中使用ddH2O稀釋至50μl；

       2、加5.5ul新鮮配制的3M NaOH；

       3、42℃水浴30min；
以下步驟在水浴期間配制：

       4、10mM 對(duì)苯二酚（氫醌），加30μl至上述水浴后混合液中（溶液變成淡黃色）；

       5、3.6M 亞硫酸氫鈉（Sigma，S9000），配制方法：1.88g亞硫酸氫鈉使用ddH2O稀釋，并以3M NaOH滴定溶液至PH 5.0，最終體積為5ml。這么大濃度的亞硫酸氫鈉很難溶，但加入NaOH后會(huì)慢慢溶解，需要有耐心。PH一定要準(zhǔn)確為5.0。加520μl至上述水浴后溶液中；

      6、EP管外裹以鋁箔紙，避光，輕柔顛倒混勻溶液；

      7、加200μl石蠟油，防止水分蒸發(fā)，限制氧化；

      8、50℃避光水浴16h。

這一步需要注意的細(xì)節(jié)：

      1、基因組DNA的量不需十分精確，寧多勿少，因?yàn)樵谝院蠹兓厥詹襟E中會(huì)有丟失，且此方法修飾最多可至4μg；

      2、所有試劑均須新鮮配制，所以配液的技術(shù)要過(guò)關(guān)，既要快，又要精確；

      3、亞硫酸氫鈉溶液呈強(qiáng)酸性，一定用堿將PH調(diào)制5.0，否則PH不合適會(huì)影響后續(xù)純化吸收；

      4、水浴最好達(dá)16小時(shí)，雖可以短至8小時(shí)，但后者修飾會(huì)有不完全。