MSP原理:
MSP是一種簡便、特異的、敏感的檢測單基因甲基化的方式。其基本原理是用亞硫酸氫鈉處理基因組DNA,未甲基化的胞嘧啶變成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變,然后用3對特異性的引物對所測基因的同一核苷酸序列進行擴增。擴增產物用DNA瓊脂糖凝膠電泳,凝膠掃描觀察分析結果。
此原理的關鍵在于3對特異引物的設計。引物序列設計在富含胞嘧啶區域以區別亞硫酸氫鈉處理后轉化的非甲基化的DNA與未轉化的甲基化的DNA,在引物的3’端,至少含有3個CpG位點,以保證區別甲基化與非甲基化DNA。野生型引物對直接根據基因組的待測序列設計。
甲基化引物對與非甲基化引物對分別根據待測序列的CpG位點甲基化與非甲基化時,經亞硫酸氫鈉轉化后的序列設計。野生型引物只能擴增出未經亞硫酸氫鈉處理的基因片段,甲基化引物對與非甲基化引物對只能分別擴增甲基化與非甲基化的基因片段,由此達到檢測基因甲基化的目的。