細胞劃痕實驗

一、實驗簡介

細胞劃痕（修復）法是一種簡捷的測定細胞遷移運動與修復能力的方法，類似體外傷口愈合模型。在體外培養皿或平板培養的單層貼壁細胞上，用微量頭或其他硬物在細胞生長的中央區域劃線，去除中央的細胞，然后繼續培養細胞至設定時間（采用無血清或低血清（<2%）排除細胞增殖的影響），取出培養板，觀察周邊細胞是否生長（修復）至中央劃痕區，以此判斷細胞的生長遷移能力。通常設定正常對照組與實驗組，實驗組中添加某些處理因素或藥物、外源性基因等，通過不同分組之間的細胞對于劃痕區的修復能力，判斷比較各組細胞的遷移與修復能力。

二、細胞劃痕實驗步驟

(1) 先用marker筆在6孔板背后，用直尺比著，均勻的劃橫線，大約每隔0.5~1cm一道，橫穿過孔。每孔至少穿過5條線。   

(2) 在孔中加入約5×105個細胞，培養細胞至匯合度達到90%以上。  

(3) 用頭比著直尺，垂直于背后的橫線劃痕。  

(4) PBS洗細胞3次，去除劃下的細胞，加入無血清培養基。

(5) 放入37℃ 5% CO2培養箱培養。按0，12，24，48h時間點取樣，100倍鏡下拍照。如果細胞遷移（修復）能力較強，需相應縮短觀察時間間隔。

(6) 結果分析：對不同時間點不同處理分組的劃痕間距進行分析。